Hva er Radial immunodiffusjon test?

Hva er Radial immunodiffusjon test?

Radial immunodifusion tester for nærværet /fraværet av virale antigener i en prøve. Antigen diffunderer inn i agaren, som inneholder spesifikke antistoff og en ring av bunnfall dannes ved antigen-antistoff-interaksjoner. Diameteren av ringen er direkte proporsjonal med konsentrasjonen av antigenet, og kan derved brukes til å kvantifisere mengden av antigen. En omvendt radial immunodiffusjon test, hvor antigenet er inkorporert i agaren, kan bli anvendt for å kvantifisere mengden av antistoff i en prøve. Stand til å påvise og kvantifisere antigener, er den radielle immunodiffusjon en teknikk hvor antistoffet er fastsatt i en agar-gel, etterfulgt av tilsetning av antigenet til formede brønner av antistoff-inneholdende agar. Etter inkubering diffusjon utbytte og antigenet som har fått lov til å diffundere inn i agaren reagerer med spesifikt antistoff, frembringer en ring av nedbør som vil danne på det punkt hvor antigenet og antistoffet har nådd ekvivalens. Men som diffusjon utgår radialt fra brønnen, et overskudd av antigen utvikler seg i området av bunnfallet får den til å oppløse bare for å danne nok en gang en større avstand fra opprinnelsessete. Bunnfallet vil forekomme bare ved den sone av ekvivalens. Jo større konsentrasjonen av antigenet i brønnen, vil den hurtigere utfelling finner sted. Diffusjon av antigen vil fortsette fra brønnen med en oppbygning av bunnfall ved den ytre kant av ringen, hvor antigenet blir møter ekstra antistoff. Systemet er i utgangspunktet i en dynamisk tilstand, som ringene øker med tiden. En statisk tilstand av utfelling er nådd når alle antigenet har diffundert inn i gelen, og utfellingen er complete.The utfelling ring omgir et område proporsjonal med konsentrasjonen av antigen målt 48 til 72 timer etter diffusjon, med antistoffkonsentrasjon holdes konstant. Diameteren av precipitin ring kan brukes til å kvantifisere konsentrasjonen av antigenet ved hjelp av sammenligning med antigen-standarder. Standardkurver kan anvendes ved bruk av disse kjente antigen-standardene. Antigenkonsentrasjonen enkelt bestemmes ved å måle diameteren av utfellingen ringen. Denne teknikken gir sensitivitet ved påvisning av et antigen til 1 til 3 mikrogram /ml antigen. For å oppnå større følsomhet bør ELISA-analyser imidlertid brukes. (2,3) standard kalibrerings CurveIn et enkelt eksperiment, tallrike kjente BSA-konsentrasjoner og en enkelt kjente prøven, kan plasseres i individuelle brønner i løpet av et anti-BSA-agar plate. Diameterne på presipitintester plater kan deretter bli målt og plottet på semi-logaritmen millimeterpapir. Den standard kalibreringskurve kan deretter plottet som BSA-konsentrasjon som funksjon av diameteren av presipitintester plater. Kurven gir mulighet for bestemmelse av den ukjente prøve konsentrasjon. Standardene fra hvert er dannet av en gradient av precipitin ring i direkte forhold til deres antigen-konsentrasjon. Små prosessuelle forskjeller, for eksempel fattige vel fylling og skive målinger, kan føre til mindre avvik av noen standard punkter